細胞計數(shù)板(也稱血球計數(shù)板)是一種用于在顯微鏡下精確計算液體中細胞數(shù)量的專用玻片。它的核心作用是定量，幫你把“肉眼看不見”的細胞變成可測量的數(shù)據(jù)。

　　它長什么樣?

　　它是一塊比普通載玻片更厚的特制玻璃板，中間有“H”形刻痕，形成兩個長方形計數(shù)平臺。每個平臺上都蝕刻著精密的網(wǎng)格，最常見的改進型紐鮑爾計數(shù)板的網(wǎng)格由9個大方格組成，中間那個大方格又細分為400個小方格，這是計數(shù)的核心區(qū)域。

　　主要作用

　　確定細胞濃度：最核心的用途。算出每毫升懸液中有多少細胞，這是后續(xù)細胞接種、培養(yǎng)等實驗的基礎(chǔ)。

　　評估細胞活力：配合臺盼藍等染料使用，死細胞會被染上顏色，活細胞則拒染。計數(shù)時分別統(tǒng)計，就能算出細胞存活率。

　　監(jiān)測細胞生長：在不同時間點計數(shù)，可以繪制細胞生長曲線，了解細胞的增殖速度和生長狀態(tài)。

　　確保實驗一致性：在進行藥物測試、病毒感染等需要對比的實驗前，用計數(shù)板調(diào)整起始細胞數(shù)量一致，能保證實驗結(jié)果的可比性。

　　如何使用與計算?

　　準備：清潔計數(shù)板和蓋玻片，將特制的厚蓋玻片蓋在網(wǎng)格區(qū)域上。

　　加樣：吸10微升左右混勻的細胞懸液，從蓋玻片邊緣的“V”形缺口注入，利用毛細作用充滿計數(shù)室。

　　計數(shù)：在顯微鏡下，按特定規(guī)則(如數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右)統(tǒng)計四角和中央共5個大方格(每個包含16個小格)內(nèi)的細胞數(shù)。

　　計算：根據(jù)公式算出原始懸液的細胞濃度。

　　細胞濃度 (個/毫升) = (5個方格的總細胞數(shù) / 5) × 10? × 稀釋倍數(shù)

　　公式中的 10? 源于計數(shù)室的高度是0.1毫米，因此一個大方格的體積正好是 0.1 µl。

　　使用注意

　　用完即清：樣本會干掉，必須立刻用蒸餾水沖洗干凈，然后晾干。嚴禁用刷子或強酸強堿清洗，以免損壞網(wǎng)格。

　　避免氣泡：加樣時不能有氣泡，否則會嚴重影響計數(shù)準確性。

　　細胞需分散：上樣前要確保細胞懸液是單個分散的，如果有成團細胞，計數(shù)結(jié)果會偏低。

　　細胞計數(shù)板使用后的處理非常關(guān)鍵，直接關(guān)系到儀器的壽命和下次計數(shù)的準確性。核心原則是：及時、溫和、清潔，嚴禁刮擦網(wǎng)格。

　　以下是標準處理流程：

　　1. 立即清潔(樣本未干時)

　　樣本一旦變干，蛋白質(zhì)和鹽分會結(jié)晶，死死粘在網(wǎng)格上，極難清除，甚至可能損壞刻線。

　　吸去樣本：用吸水紙輕輕接觸蓋玻片邊緣，吸走多余的細胞懸液。

　　分離蓋玻片：小心地將特制的厚蓋玻片與計數(shù)板分離。

　　沖洗：用蒸餾水或去離子水(不要用自來水，其中的礦物質(zhì)會留下水漬)分別沖洗計數(shù)板的兩個計數(shù)平臺和蓋玻片?？梢允褂孟雌繘_洗，水流不要太猛。

　　2. 輕柔擦拭(如有必要)

　　沖洗后，如果還有殘留物(如細胞碎片或少量蛋白)，可以進行擦拭。

　　正確工具：使用擦鏡紙或非常柔軟的棉布。

　　正確手法：將擦鏡紙用水打濕，朝同一個方向(例如從左到右)輕輕擦拭網(wǎng)格區(qū)域，不要來回擦。用干的部分吸去水分。

　　嚴禁使用：任何刷子(包括軟毛刷)、紙巾(木漿纖維會劃傷玻璃)、手指、酒精或有機溶劑(可能會溶解網(wǎng)格線中的材質(zhì)或留下薄膜)。

　　3. 干燥

　　清潔后，需要確保計數(shù)板和蓋玻片干燥，防止水漬殘留和霉菌滋生。

　　自然晾干：將計數(shù)板和蓋玻片放在干凈的吸水紙(如擦鏡紙)上，在無塵處自然晾干。

　　加速干燥：可用洗耳球或壓縮空氣(確保無油)輕輕吹干。

　　注意：不要用烘箱高溫烘干，可能導(dǎo)致玻片變形。

　　4. 檢查與保存

　　干燥后，在光線下檢查計數(shù)區(qū)域。如果看到網(wǎng)格線清晰、無斑點、無水漬，說明清潔合格。

　　保存：將清潔干燥的計數(shù)板放回專用的盒子或培養(yǎng)皿中，蓋上蓋子防塵。蓋玻片單獨保存。

　　下次使用前：下次使用前，只需用擦鏡紙輕輕擦拭一下除塵即可，無需再次水洗。